القای آلزیم سیتوکروم P4501A1 با بتانفتوفلاون و بررسی برخی از خصوصیات آن در فیل ماهی ( Huso huso )

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 رشت

2 کرمانشاه

3 نور

چکیده

 



سیتوکروم P4501A1 مهمترین ایزوآنزیم سیستم مونواکسیژنازی در ماهی است که توسط ترکیبات آروماتیک چند حلقه ای القا می شود. در پژوهش حاضر تاثیر ماده بتانفتوفلاون در القای این ایزوآنزیم در فیل ماهی بررسی گردید و برخی از خواص کینیتیکی این ایزوآنزیم مورد مطالعه قرار گرفت. ماده بتانفتوفلاون به صورت داخل صفاقی به ماهیان تزریق گردید. میزان فعالیت آنزیم سیتوکروم P4501A1 از روی واکنش دی اتیلاسیون سوبسترای 7- اتوکسی رزروفین (EROD) با روش فلورومتری و میزان نسبی پروتئین های القا شده با روش الکتروفورز در ژل پلی اکریل آمید در حضور سدیم دودسیل سولفات (SDS- PAGE) تعیین گردید. نتایج نشان داد که نرخ واکنش در فراکسیون میکروزومی ماهیان تیمار شده 15 تا 26 برابر ماهیان شاهد در شرایط مشابه آزمایش است. اپتیمم فعالیت این آنزیم در دامنه دمای 20 تا 25 درجه سانتیگراد قرار می گیرد و فعالیت آنزیم در غلظت 1.53 میکرومولار از سوبسترا و غلظت 180 میکروگرم پروتئین میکروزومی به حداکثر می رسد. الگوی SDS-PAGE فراکسیون میکروزومی در ماهیان تیمار شده حضور پروتئینی را با وزن مولکولی حدود 58±1 کیلو دالتون نشان می دهد که همان آنزیم سیتوکروم P4501A1 می باشد. بنابراین اثر القایی بتانفتوفلاون موجب القای ژن سیتوکروم P4501A1 و افزایش بیوسنتز این آنزیم می گردد که بصورت افزایش در نرخ فعالیت آنزیم در واکنش EROD نمایانگر می شود.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Induction of Cytochrome P4501A1 by beta-naphthoflavone and determination of enzyme properties in Huso huso

نویسندگان [English]

  • K. Karimzadeh 1
  • A. Mostafaei 2
  • A. Esmaeili sari 3
  • M. Porkazemi 1
  • A. Zahmatkesh 1
1 Rasht
2 Kermanshah
3 Noor
چکیده [English]

Cytochrome P4501A1 is a major isoenzyme in fish monooxygenase system which is induced by polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) compounds. In this research, the inducing effect of p-naphthoflavone and its catalytic properties was studied in Huso huso liver. Fish were given ip injection of p-naphthoflavone at three different doses. The enzyme activity was measured with de-ethylation of ethoxyresorufin reaction (EROD) by flourometery method and relative amount of induced proteins were determined using polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The results showed that EROD activity in the microsomal fraction of the treated fish was 15-26 folds that of the control group. Optimum activity of this enzyme was observed at 20-25 degrees centigrade. The maximum enzyme activity was seen in the presence of 180 micrograms of microsomal protein and 1.53BM of 7-ethoxyresorufin. SDS-PAGE of microsomal protein pattern in the treated fish revealed a protein with molecular mass I K Da translating to cytochrome P4501A. We conclude that the p-naphthoflavone in fish liver can induce cytochrome P4501A gene and increase its biosynthesis leading to raised enzyme activity in EROD reaction.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Cytochrome P4501AI
  • Beta-naphtho flavone
  • Huso huso. Iran