معرفی نشانگرهای ژنتیکی جهت شناسایی انگل های لرنه آ سیپریناسه آ و لرنه آ کتنوفارینگودونی با استفاده از روش RAPD

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

چکیده

 



این تحقیق بمنظور مقایسه مولکولی دو انگل لرنه‏آ سیپریناسه‏آ (Lernaea cyprinacea)و انگل لرنه‏آ کتنوفارینگودونی((L. ctenopharyngodoni با استفاده از روش (Random Amplified Polymorphic DNA) یا RAPD و امکان معرفی نشانگرهای مولکولی صورت گرفت. برای این منظور 43 نمونه انگل لرنه‏آ از دو گونه فوق از استانهای خوزستان و گیلان جمع‏آوری و DNA آنها به روش فنل- کلروفرم استخراج گردید. پس از بررسی کیفیت و کمیت DNA بوسیله الکتروفورز ژل آگارز1 درصد و دستگاه اسپکتوفتومتر، تحت شرایط خاصی PCRگردید و محصول PCR بر روی ژل پلی آکریلامید 6 درصد الکتروفورز شد و سپس با نیترات نقره رنگ‏آمیزی و در پایان اندازه و تعداد نوارهای DNA با استفاده از دستگاه مستند سازی ژل ثبت و آنالیزآماری آن با برنامه کامپیوتری POP GEN 32مورد ارزیابی قرار گرفت.
در این تحقیق از 42 آغازگر 10 نوکلئوتیدی استفاده گردید که در مجموع 397 باند DNA تولید شد که از این بین 349 باند مشخص و چند شکلی در بین دو گونه شناسایی گردید که تعدادی از آنها را می توان بعنوان نشانگر مولکولی جهت شناسایی دو گونه مزبور بکار برد. تجزیه و تحلیل داده های حاصل از محصول PCR نشان داد که میزان تنوع ژنتیکی در لرنه‏آ کتنوفارینگودونی استان گیلان (15/1درصد) بیشتر از خوزستان (صفر) بوده ولی در لرنه‏آ سیپریناسه‏آ در استان خوزستان (46/27درصد) به میزان 26/7 برابر استان گیلان (78/3درصد) بوده است. از طرف دیگر حدود 88 درصد تفاوت ژنتیکی بین دو گونه انگل لرنه‏آ مشاهده شد که می‏توان به اطمینان اعلام نمود که از لحاظ ژنتیکی گونه لرنه‏آ کتنوفارینگودونی یک گونه مستقل از لرنه‏آ سیپریناسه‏آ می‏باشد.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

INTRODUCING MOLECULAR MARKERS FOR LERNAEA CYPRINACEA AND LERNAEA CTENOPHARYNGODONI USING RAPD TECHNIQUE

نویسندگان [English]

  • M. Porkazemi
  • H. Asadian
  • J. Pazoki
  • M. Masomian
  • H. Ebrahimzadeh mosavi
چکیده [English]

Molecular comparison of two parasites Lernaea cyprinacea and Lernaea ctenopharyngodoni was carried out using RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) technique. A total of 43 Lernaea specimens belonging to the two species were collected from the Guilan and Khouzestan Provinces. DNA was extracted using the Phenol-chloroform method. The quality and quantity of DNA was assessed using 1% Agarose gel electrophoresis and spectrophotometer. Polymerase Chain Reaction (PCR) was conducted on the target DNA under specific conditions and PCR products were subjected to electrophoresis on polyacrylamide gels (6%). Polyacrylamide gels were stained using silver nitrate and DNA bands were analyzed with BioCapt software. The genetic analysis was conducted using POP GEN 32 software.
Forty two primers, 10 nucleotides each were used for PCR reaction. Totally, 397 RAPD loci were counted on polyacrylamide gel where 349 identical loci were polymorphic of which some bands may be used as genetic markers for the identification of both Lernaea species
. Data analysis on PCR products showed higher genetic variation (1.15%) of Lernaea ctenopharyngodoni in the Guilan Province as compared to that of the Khouzestan (0.0%).However, genetic variation (27.46%) of Lernaea cyprinacea in the Khouzestan province was 7.26 times higher than that of the Guilan province (3.78%). The two species showed a genetic differentiation of approximately 88%. Based on the observed molecular differences, we state that Lernaea ctenopharyngodoni is a genetically independent species from Lernaea cyprinacea.

کلیدواژه‌ها [English]

  • RAPD
  • PCR
  • Lernaea cyprinacea
  • LERNAEA CTENOPHARYNGODONI
  • Guilan province
  • KHOUZESTAN PROVINCE