بررسی تنوع ژنتیکی ماهی قزل آلای رنگین کمان با استفاده از نشانگرهای ریزماهواره در مزارع پرورشی ایران

نویسندگان

چکیده

تعداد 64 نمونه از ماهی قزل الا (Onchorhynchus mykiss) از 3 مزرعه از استانهای مختلف کشور جمع آوری گردید. از هر نمونه 2 تا 3 گرم از باله دمی بریده و پس از تثبیت در الکل اتانول مطلق به آزمایشگاه منتقل گردید. DNA ژنومی نمونه‌ها از بافت نرم باله ماهی به روش فنل- کلروفرم استخراج و سپس کمیت و کیفیت DNA استخراج شده با استفاده از اسپکتروفتومتر و الکتروفورز ژل آگارز 1 درصد تعیین شد. واکنش PCR با استفاده از 8 جفت پرایمر ریزماهواره انجام گرفت. محصول PCR با استفاده از ژل پلی آکریل آمید 6 درصد الکتروفورز و با نیترات نقره رنگ آمیزی شد. مقادیر مربوط به تعداد آللهای واقعی و موثر، هتروزیگوسیتی مشاهده شده و مورد انتظار، شاخص شانون، تعادل هاردی- واینبرگ، مقادیر FST بر اساس تست AMOVA با استفاده از نرم افزار ژنتیکی Gene Alex و Popgene محاسبه گردید. نتایج بدست آمده از این بررسی نشان می‌دهد که 8 جفت پرایمر میکروستلایتی بررسی شده، پلی‌مورف بودند. در مجموع اللهای شناسائی شده در محدوده اندازه بین 280-64 جفت باز بوده است. جایگاه OtsG 249 با 9 آلل دارای بیشترین آلل و جایگاه OtsG 432 و OtsG 474 با 2 آلل دارای کمترین تعداد آلل بود. همچنین هتروزیگوسیتی مشاهده شده (Ho) در جایگاههای هشت گانه بین 869/0 تا 916/0 بود. در بررسی تعادل هاردی- واینبرگ در بیشتر جایگاههای مورد بررسی انحراف از تعادل هاردی– واینبرگ را مشاهده شد . نتایج بدست آمده از FST نشان می‌دهد که حداکثر و حداقل آن به ترتیب 079/0 بین نمونه‌های منطقه تهران - یاسوج و 041/0بین نمونه‌های مزرعه همدان - یاسوج مشاهده می با‌شد. براساس نتایج حاصل از تست AMOVA بین تمام مزارع با یکدیگر اختلاف معنی دار مشاهده می شود. با توجه به داده های حاصل از بررسی حاضر، تنوع ژنتیکی بدست آمده در مزارع پرورشی ماهی قزل الا در سه استان قابل توجه بوده و می تواند به عنوان مطالعه پایه در ایجاد جمعیت پایه در برنامه های اصلاح نژادی کمک نماید.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Genetic variation in farmed population of Rainbow trout (Onchorhynchus mykiss) based on microsatellite markers in Iran

نویسندگان [English]

  • E. Einollah Gorjipoor
  • Sajad Nazari
چکیده [English]

A total of 64 specimens of rainbow trout (Onchorhynchus mykiss) from 3 different regions in
Iran were collected. About 2-3 g of caudal fin samples were removed from each specimen and
preserved in absolute ethyl alcohol and transferred to the genetic laboratory. Genomic DNA
was extracted using the phenol-chloroform method and then DNA content and quality was
determined using spectrophotometry and agarose gel electrophoresis, respectively.
Polymerase Chain Reaction (PCR) of genomic DNA fin samples was carried out using 8 pairs
of microsatellite primers. All PCR products were electrophoresed on 6% polyacrylamide gel
and stained with silver nitrate. Following the scoring of alleles, all parameters including
effective number of alleles, observed and expected heterozygosity, shanon index, Hardy-
Weinberg equilibrium test and FST were calculated using AMOVA analysis in the GenAlex
and Popgene programs. The results showed that 8 pairs of microsatellite primers were
polymorphic. In total, alleles were determined with the range size of 64-280 bp. The locus
OtsG 249 had maximum number of allele (9) and loci OtsG 432 and OtsG 474 had minimum
number of allele (2). The observed heterozygosity was between 0.869 and 0.916. Hardy-
Weinberg departure was observed for most loci from all farms and were disequilibrium. The
Fst results showed that maximum FST (0.079) were between farms in Tehran and Yasuj and
minimum (0.041) were between farms in Hamadan and Yasuj. Based on the results of
AMOVA analysis, significant differences were detected between all farms. The results
suggest that the unique genetic variation of rainbow trout in hatchery farms of Iran represents
a highly valuable genetic resource and provide useful information for creating a based
population in the future breeding programs.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Rainbow trout
  • Population genetic
  • microsatellite
  • breeding program