معرفی نشانگرهای ژنتیکی برای شناسایی و جداسازی پنج گونه از خانواده کپور ماهیان دریای خزر به روش PCR-PFLPs

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

چکیده

 



در این تحقیق 15 نمونه ماهی سفید Rutilus frisii kutum (kamensky، 1901)، 10 نمونه سس ماهی بزرگ سر Barbus capito (Gueldenstaedti، 1772)، 10 نمونه ماهی سیم Abramis brama (Linnaeus، 1785)، 10 نمونه ماهی ماش Aspius aspius (Linnaeus، 1758) و 15 نمونه باله ماهی کلمه Rutilus rutilus caspicus در مکانهای صید تجاری و در تیوپ های 500 میکرولیتری جمع آوری گردید. DNA کلی این نمونه ها به روش فنل کلروفرم (Hillis & Moritz، 1990) استخراج شدند و با استفاده از یک جفت پرایمر (جلودار) دارای توالی نوکلئوتیدهای ژن سیتوکروم b ماهی کلمه به روش PCR ازدیاد پیدا کردند.
جهت آنالیز RFLPs، محصول PCR ژن سیتوکروم (1117bp) b هر یک از نمونه های ماهی، با پنج آنزیم محدودالاثر (DNAasa) در دمای مناسب انکوباسیون، هضم گردیدند. باندهای DNA، با الکتروفورز عمودی در ژل پلی اکریلاماید و رنگ آمیزی نیترات نقره آشکار گردیدند و مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. پنج آنزیم Hinf I، Hinc II، Hha I، RsaI و Mbo I الگوهای پلی مورفیسم در بین برخی گونه ها نشان دادند که در نتیجه ژنوتیپ های ناشی از هضم آنزیمی از 4 آنزیم Hinf I، Mbo I، Hha I و Rsa I هاپلوتیپ های AAAA را برای سس بزرگ سر، BBBB برای کلمه، CCCC برای سیم و EEEE را برای ماهی سفید نشان دادند که هر یک از این هاپلوتیپ ها برای هر یک از این گونه ها دارای اهمیت نشانگر ژنتیکی گونه ای می باشد و برای تمایز این گونه ها دارای ارزش می باشند.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

INTRODUCING GENETIC MARKERS TO IDENTIFY AND DISTINGUISH FIVE SPECIES OF CYPRINIDAE IN THE CASPIAN SEA USING PCR-RFLP

نویسندگان [English]

  • S. Rezvani
  • F. Laloei
  • R. Aghili
  • H. Ebrahimzadeh mosavi
چکیده [English]

Cyprinids are the main and most significant bony fishes found in the Caspian Sea. In this study, 15 specimens of Rutilus frisii kutum (Kamensky, 1901), 10 specimens of Barbus capita (Gueldenstaedtii, 1772), 10 specimens of Bream Abramis brama (Linnaeus, 1785), 10 specimens of Redlip, Aspius aspius, and 15 specimens of Kora volba, Rutilus ruti/us caspius, were collected from commercial catch stations. DNA from all specimens was extracted using the phenol-chloroform method in 500lll tubes and amplified using PCR method with a pair of primers with cytochrom b gene sequence of Kora volba. For RFLP analysis, PCR products of cytochorome gene b (1117 bp) from each species were digested with five restriction enzymes under suitable conditions of incubation. DNA bands were visualized by gel electrophoresis (polyacrylamide) and staining with silver nitrate. Five enzyme Rsa 1, Hinf I, Hhal, Hinc II, and Mbo I showed polymorphism. Genotypes obtained from digestion of enzymes Rsa I, Hinf I, Hha I showed haplotypes AAAAA for Barbus capita, BBBB for R. rutilus caspius, CCCC for Bream Abramis brama, DDDD for Aspius aspius and EEEE for R. frisii kutum. Each of these haplotypes serves as a genetic marker for the species and is of significant importance in distinguishing them.

کلیدواژه‌ها [English]

  • CYPRINIDAE
  • MOLECULAR MARKE
  • PCR-RFLP
  • Caspian Sea